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日立离心机有关新冠病毒的几种离心方案推荐

售后维修 2020-08-10 07:40:28

方案一 Percoll自形成梯度：日立P28ST转头（6X40ml）

单管配置：Percoll原液6.5ml，0.25M蔗糖23ml加样品6ml，充分混合后注入40PA离心管至距管口3mm冰箱中预冷2小时后制备二管放入吊桶挂在P28ST转头上（其余4个空吊桶也要挂上），20,000rpm，1小时，5℃ 加速8，减速8。

结果：病毒沉降在Percoll 1.06密度处。

梯度取出：1）手工取出：离心管倾斜小角度后用定量吸管吸出，13ml PET离心管分别收集26管（每管0.5ml），PA管分别收集21管（每管0.5ml），各管分别测OD给出OD→离心管管容量曲线,可以看到病毒峰,确定离心管编号后即可移出,蔗糖可通过透析除去.2)仪器收集:用日立 DGF-U梯度形成一收集仪,每次做一个管子,DGF-U后出口接流动池的分光光度计，连续测OD并绘出曲线后分部收集,根据病毒峰的位置,可以确定病毒集中在哪些离心管中,透析后得到较纯病毒液.

日立离心机病毒离心方案

方案二蔗糖阶梯梯度

单管配置：用0.01M Tris-Hcl配置蔗糖梯度，离心管下部为45%（W/W）（PET管为4ml，PA管为3ml），上部为32%（W/W）（PET管为4ml，PA管为3ml），表面加样品至距管口3mm（约为4.5ml）。对称双管，38,000rpm（256,000Xg）X 1小时，5℃ 加速8，减速7。

结果：病毒沉降在二个蔗糖梯度之间。

方案三连续蔗糖梯度：日立CPMX或WX系列离心机，P40ST转头13PET管或13PA管。

单管配置：

1）13PET管：20%-50%（W/W）连续蔗糖梯度。

用0.01M Tris-Hcl配置蔗糖梯度：用20%，25%，30%，35%，40%，45%，50%（W/W）蔗糖液各1.5ml，从离心管低部逐层向上铺设（底部高密度），铺二管，直立在试管架上室温过夜，第二天早晨放入冰箱仅5℃预冷2小时。在蔗糖液上部加样品（约2ml）至距管口3mm。对称放入P40ST转头吊桶（转头及吊桶在冰柜中预冷过夜）对称双管，38,000rpm（256,000Xg）X 1小时，5℃ 加速8，减速7。

2）13PA管：20%-50%（W/W）连续蔗糖梯度

用0.01M Tris-Hcl配置蔗糖梯度：用20%，25%，30%，35%，40%，45%，50%（W/W）蔗糖液各1.2ml，从离心管低部逐层向上铺设（低部高密度），铺二管，直立在试管架上室温过夜，第二天早晨放入冰箱5℃预冷2小时。在蔗糖液上部加样品（约2ml）至距管口3mm。对称放入P40ST转头吊桶（转头及吊桶在冰柜中预冷过夜）对称双管，38,000rpm（256,000Xg）X 1小时，5℃ 加速8，减速7。

结果：冠状病毒应沉降在蔗糖36%-40%之间（注意：空吊桶必须都按编号挂在转头上）

如有任何问题请咨询日立离心事业部：4008-525-990